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【转载】 《皮肤养生学》（36）—— 第五节 评价防治红血丝效果的检测方法

美容---皮肤养生学

 

第五节 评价防治红血丝效果的检测方法

 

目前尚没有评价防治红血丝效果的标准检测方法，一般通过测试血管内皮生长因子抑制率、弹性硬蛋白酶活性抑制率、增加血管紧张素转化酶活性、降低激肽释放酶的活性等试验反应相关化妆品或添加剂防治红血丝的功效。

 

1. 酶联免疫试验测定血管内皮生长因子抑制率

 

酶联免疫方法由Engvall和Perlmann 于1971年建立。它是一项结合免疫学、生物学、医学的技术。

 

ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

 

酶联免疫法大体可分为以下几类：竞争法、双抗法、抗抗法以及抑制性测定法等。竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。 双抗法是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。抗抗法是利用特定抗原能专一地结合和固定待测抗体，然后再利用酶标抗体抗球蛋白直接测定固定了的待测抗体。抑制性测定法是一种将间接法和竞争法结合所产生的测定方法，主要是根据待测样品中抗原与包被的同种抗原可与相应的抗体发生竞争性结合的原理。

   

本实验的检测方法主要运用的抑制性测定法，Flt-1的活性通过PolyE4Y作为底物来进行评价，PolyE4Y是一个多肽聚合物。PolyE4Y中被磷酸化的酪氨酸基团可以通过酪氨酸磷酸化单克隆抗体PY20来识别。然后，辣根过氧化物酶（HRP）抗体作为第二抗体结合PY20，再加入底物反应，在492nm左右进行紫外吸收产生一种物质。绘制标准曲线，不加入植物活性成分为空白对照组，实验组与其进行比较，得到相关抑制率。

 

 

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